當(dāng)細(xì)胞生物學(xué)家第一次發(fā)現(xiàn)可能有一種脂質(zhì)參與他們最喜歡的途徑時(shí)，這有點(diǎn)像在馬路對面找到一堵墻(就像當(dāng)脂質(zhì)學(xué)家在他們的路上找到一種蛋白質(zhì)一樣……)。

      由于脂質(zhì)的不同性質(zhì)，大多數(shù)細(xì)胞生物學(xué)家都害怕在他們的研究過程中不得不面對這種情況。好消息是，有一些簡單的方法可以幫助克服這一障礙，使研究特定途徑中的脂質(zhì)變得更容易。在這里，我想介紹一些脂配體相互作用研究的分析和準(zhǔn)備工具。

1 覆蓋試驗(yàn)Overlay assays-鑒定與給定蛋白質(zhì)相互作用的脂質(zhì)

      這些分析方法允許鑒定一種或多種脂質(zhì)與給定蛋白質(zhì)相互作用。

      與Western-blot原理類似，它們的原理是在表面涂上各種類型的脂質(zhì)，這些脂質(zhì)將與已知的蛋白質(zhì)接觸，這種蛋白質(zhì)將被標(biāo)記或抗體臨時(shí)檢測到。脂質(zhì)的載體通常是硝化纖維素膜(圖1)。與點(diǎn)印跡法一樣，需要優(yōu)化一些實(shí)驗(yàn)參數(shù)(如緩沖液、蛋白質(zhì)純化或蛋白質(zhì)濃度)。

      當(dāng)可用蛋白質(zhì)的數(shù)量有，小的“覆蓋分析格式"可以用少于0.5 mg的蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測。這是一種簡單的方法來測試一種感興趣的蛋白質(zhì)對各種脂質(zhì)的結(jié)合能力!

2 下拉試驗(yàn)Pull-down assays-發(fā)現(xiàn)一種已知脂質(zhì)的蛋白質(zhì)伙伴

      對于相反的實(shí)驗(yàn)設(shè)置，當(dāng)您想要識別已知脂質(zhì)的蛋白質(zhì)伴侶時(shí)，瓊脂糖為基礎(chǔ)的下拉試驗(yàn)等制備技術(shù)將是您的選擇:

*瓊脂糖珠包被確定的脂質(zhì)可以被進(jìn)一步孵育與細(xì)胞裂解液，上清液，重組蛋白…

* 然后相互作用的復(fù)合體通過離心將它們拉下來。

       它允許分離脂質(zhì)結(jié)合蛋白的數(shù)量適合進(jìn)一步鑒定和表征。它經(jīng)常與細(xì)胞裂解液一起用于“撈出"脂質(zhì)對偶物(圖4)。

3 漂浮試驗(yàn)Floatation assays-用于更高特異性的蛋白質(zhì)-脂質(zhì)相互作用

       當(dāng)你在尋找更高特異性的蛋白質(zhì)-脂質(zhì)相互作用時(shí)，另一種基于脂質(zhì)富集脂質(zhì)體(用作脂質(zhì)/配體相互作用的基質(zhì)支持)的制備方法是可用的。

       與GEM脂筏提取(葡萄糖梯度超離心)類似，脂質(zhì)體預(yù)結(jié)合到脂質(zhì)配體上，將沿著超離心制備的葡萄糖梯度分成幾個(gè)部分分布(圖5)。

這些富脂脂質(zhì)體有許多優(yōu)點(diǎn):

*聚脂質(zhì)體PolyPIPosomes是聚合的脂質(zhì)體，

*增加穩(wěn)定性(長達(dá)6個(gè)月)，

*生物素標(biāo)簽，方便鏈霉親和素檢測，

*尺寸均勻(~200 nm)，可進(jìn)行浮選試驗(yàn)，

*這些脂質(zhì)體也可用于:表面等離子體共振，脂質(zhì)體覆蓋分析，ITC。

        想知道更多，讓你的生活更輕松，以防你偶然發(fā)現(xiàn)“可怕的脂質(zhì)"嗎?

        你有興趣了解更多關(guān)于這些脂配體相互作用工具嗎?

        與脂質(zhì)組學(xué)專家取得聯(lián)系!

默瑞生物

       默瑞(上海)生物科技有限公司，作為專業(yè)的生命科學(xué)產(chǎn)品推廣與服務(wù)商，以“創(chuàng)新，專業(yè)，共贏"的理念，不斷強(qiáng)化服務(wù)體系，提升客戶體驗(yàn)，結(jié)合國內(nèi)外優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品提供高標(biāo)準(zhǔn)完整解決方案，幫助科研客戶和生物技術(shù)企業(yè)高效創(chuàng)新，加速轉(zhuǎn)化，創(chuàng)造更多優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，提升社會福祉，實(shí)現(xiàn)多方共贏。

   默瑞生物創(chuàng)立以來,已經(jīng)陸續(xù)導(dǎo)入TwistDx,enzymatics,KAPA BIOSYSTEMS,BioDynami,Jackson,Echelon,ChromoTek,Nanocs,Biotechrabbit,Lee Biosolutions, magtivio,美的醫(yī)療冰箱,FOUR E'S科學(xué)儀器等優(yōu)質(zhì)國際品牌，逐步培育成為專業(yè)用戶的選擇。

     代理試劑產(chǎn)品有：TwistDx恒溫?cái)U(kuò)增試劑盒,Echelon脂類研究試劑,KAPA BIOSYSTEMS二代測序試劑, Enzymatics二代測序酶,Jackson ImmunoResearch抗體,ChromoTek熒光蛋白及抗體,Horizon Discovery測序標(biāo)準(zhǔn)品,Biomatik公司Elisa試劑盒,Nanocs PEG修飾劑,Spectrumlabs透析袋,Polysciences微球,JenaBioscience分子試劑,Lifespan Technologies硫酸葡聚糖ELISA試劑盒及抗體,Lee Biosolutions抗體,Emfret心血管研究抗體,Magtivio B.V.DNA提取磁珠,Biontex Laboratories轉(zhuǎn)染試劑,Canvax™細(xì)胞凋亡檢測試劑盒,Matriks Biotek®生物藥物檢測試劑盒,Immunostep流式細(xì)胞術(shù)抗體，F(xiàn)uller Laboratories感染性疾病檢測試劑盒,SICGEN抗體,biotechrabbit酶及抗體等。